一、蛋白为什么要冻干？对蛋白的影响有哪些？

蛋白质对热敏感，冻干能使蛋白质在存储过程中最大程度的保持活性，延长保存时间，同时也能降低运输成本。冻干对蛋白质的影响包括:可能造成蛋白质部分失活、聚集和其它问题。但可以通过添加保护剂，稳定剂，增溶剂，抗氧化剂和控制冻干的各种条件来尽可能降低这些负面的影响。

二、冻干前为什么向蛋白溶液中加保护剂？普欣常用的保护剂是什么？

冻干对蛋白质的活性会有一定的影响，加入保护剂可以减小这种影响，最大程度上保护蛋白的活性。通常的保护剂或稳定剂有糖类，多元醇，某些蛋白和氨基酸等。本公司常用的保护剂有：海藻糖、吐温等。

一、冻干形式的重组蛋白产品到货时是室温运输，说明书显示它应储存在-20ºC。这种运输方式会影响产品活性吗？

冻干粉产品在环境温度（Ambient）下运输，不会受到影响。冷冻干燥可以提高蛋白产品的稳定性，同时减少包装材料和运输费用。我们对冻干产品的运输条件进行过测试，确保产品质量。

一、什么是海藻糖（Trehalose），它在配方中起什么作用？

海藻糖是一种非还原糖，在美拉德反应中不与氨基酸或蛋白质发生反应。它存在于自然界的许多植物和动物中。海藻糖可以稳定蛋白质，防止冷冻造成的伤害，还可以使蛋白质在冻干时更耐水，从而使产品在重溶时产生沉淀的可能性降低。

二、海藻糖会影响连接反应（Conjugation）吗？

海藻糖的存在可能会干扰蛋白质的成功结合。 这将取决于连接的方法，客户最好在购买产品之前做相关研究。

三、产品标签上的“mg/g”是什么意思？

由于重组蛋白冻干前溶液中会添加保护剂或稳定剂等，所以重组蛋白的质量不一定等同于冻干粉的质量。mg/g指的是每克（g）冻干粉末中含有的重组蛋白的质量（mg）。

一、蛋白是否可用于体内实验（In vivo）？推荐浓度是多少？

我司蛋白不进行体内测试，您可以查找已验证过生物活性的蛋白，并通过查看该产品的体内应用的参考文献，来确定工作浓度。

二、如果产品包含海藻糖，体内实验（In vivo）是否会对动物产生影响？

海藻糖不太可能影响体内实验。它已被批准作为一种辅料用于人类注射药物。研发系统使用的海藻糖来自酿酒酵母，经HPAE测定，其纯度至少为98.5%。

一、产品可以应用于哪些方面？

本公司的产品可以按照科研领域分类，但是对其具体应用并未给出明确指导。鉴于蛋白质根据其功能可以挖掘多重应用领域及应用方法，本公司推荐客户根据文献记载进行试验，或根据科学的研究，自行挖掘其应用方法。

二、为什么有的蛋白带标签？

带标签蛋白一般是为了用于部分客户的实验要求。如His-tag和GST-tag可以使用亲和纯化层析柱纯化；与免疫球蛋白的Fc片段融合的蛋白可用于抗体研究等。

三、某些产品如1002-08的氨基酸序列，官网未显示，普欣可以提供吗？

部分产品的氨基酸序列如果在官网未显示，则有可能作为保密信息而无法提供，但部分产品可提供蛋白的Accession#和GeneID供参考。如有疑问，可以拨打客户服务热线400-821-3475。

一、蛋白如何定量的？

通常采用BCA、Bradford和OD280三种方法来定量。

二、为什么用我的定量方法测出来的结果与普欣标签上的定量不符？

采用不同的蛋白定量方法，会有不同的结果。有时候定量方法不同造成的结果差异很显著。每个检测方法都有其局限性，针对不同的蛋白，需要选择其合适的检测方法。另外，样品的稀释过程，涉及稀释方式，如高浓度直接稀释到低浓度（mg-ug-ng）会比10倍梯度稀释存在更大误差；而使用的耗材如非低吸附类（枪头、可立管等），也可能造成样品浓度偏差；由于稀释过程中会引入很多不确定因素，所以我们不建议对微量蛋白进行定量。

三、我购买了小包装冻干蛋白质，为什么收到货后只有一只空管？

与市场上的有些蛋白产品不同，本公司绝大部分的产品中不含载体蛋白或其他添加物(如牛血清白蛋白（BSA），人血清白蛋白 (HSA)和海藻糖等），并且以最低含盐量的溶液冻干。因此，微量的蛋白在冻干过程中沉积在管内，形成很薄或几乎看不见的蛋白层，甚至蛋白粉末还可能飘悬在管壁上。打开管盖前，我们建议使用离心机快速离心20-30秒，使附着在管盖或管壁的蛋白粉末聚集到管底。

一、如何重溶（Reconstitute）冻干粉蛋白？

除非说明书上有更具体的说明，我们建议采用以下方式：

（1）将试剂瓶和重溶缓冲液平衡至室温。

（2）短暂离心试剂瓶以确保在小瓶底部收集所有冻干物。

（3）加入推荐的重溶缓冲液，达到产品说明上推荐的浓度。避免剧烈振荡或移液器吹打，这可能导致蛋白质变性。

（4）使试剂瓶在室温下重溶15-30分钟，可使用360度摇床或手动轻轻上下颠倒。

（5）每管体积不小于10μL分装，并按产品说明书上的指示储存。

（6）如果小瓶内呈现薄片或颗粒，则在室温下将产品混合几小时，然后在4℃过夜。

二、贵司的蛋白产品重溶浓度是多少？

您可参考产品页面“Reconstitution”部分。例如：产品cat#105-02，此产品提供的是冻干粉形式，建议重溶浓度为：在无菌蒸馏水或无菌含0.1 % BSA水溶液中重溶至0.1-1.0 mg/mL。另外我司通常推荐质量较高的BSA（高纯度，低内毒素，低脂肪酸和可用作细胞培养）。短期内使用，可以直接用无菌水溶解，如果需要分装冻存，建议加入0.1 % BSA，以避免蛋白发生降解。另外，我司亦提供部分高浓度产品，例如：cat#105-02G，此产品提供的是冻干粉形式，建议重溶浓度为：在无菌蒸馏水或无菌含0.1 % BSA水溶液中重溶至0.1-5.0 mg/mL。

一、如何确定蛋白活性实验参考用量？

凡经过生物活性验证的蛋白产品，在我司产品页面均有活性验证信息，客户可在生物活性(Biological Activity)一栏中查看使用的细胞类型，ED50值等信息。对于不同的蛋白产品，活性检测的方法不同。同一种蛋白产品，在不同的细胞上检测，所用的方法也是不同的。最终得到的ED50值也不同。在没有文献依据和参考用量的情况下，初次使用某种蛋白，建议您尝试浓度梯度。

二、为何ED50是一个范围？

生物活性实验是对蛋白质的生物学反应的一种测量。因此，生物活性实验中的任何变化也可能导致不同的结果。这种变化可能包括细胞密度，细胞年龄，传代数，营养状况，培养基和所用的添加剂，以及实验操作者的操作手法。由于生物活性实验的可变性，同一蛋白质在不同情况下可能不会产生相同的ED50。因此普欣的蛋白质说明书上给出ED50的范围。

三、贵司的蛋白活性是怎么测出的？

我司已经过活性验证的蛋白产品，通常会在产品页面技术参数中列出“Biological Activity”，例如：产品cat# GMP-606-09，在“Biological Activity”部分显示“活性测定为当用作细胞培养的基质时，其支持细胞附着和扩散的能力：在这个应用中，能够达到这种效果的推荐浓度通常是1-5 μg/cm²。纤维连接蛋白也可添加至培养基中促进细胞扩散，推荐浓度为0.5 ~ 50 μg/mL。

四、以ED50或units/mg标示比活性(specific activity)，两者之间有什么关联，怎么换算？

半数有效浓度ED50的定义是可诱导50%最大反应的细胞因子浓度，这种活性表示法仅适用于剂量反应曲线呈S形的细胞因子。将ED50 (ng/ml)转化为比活性(units/mg)的公式为：

五、蛋白质干粉重溶时，说明书中提到用酸来溶解，会不会对蛋白质活性造成影响？用作细胞实验时，会伤害细胞吗？

蛋白质使用说明书上推荐的溶解方法，会得到最好的溶解效果，保证蛋白质活性复原最完全。在您使用过程中，此原液被稀释成工作液后，微量的酸不会对您的实验有影响。

一、产品如何保存？

因为产品性质不同，请仔细阅读说明书，并根据说明书描述方法，妥善存储。

一、GMP蛋白与传统蛋白的区别是什么？ 

通常，GMP蛋白和传统蛋白的序列、表达系统是相同的。PrimeGene®的GMP蛋白根据ICH-Q7a Good Manufacturing Practice Guide for Active Pharmaceutical ingredients 文件的相关部分制作，具有以下优点：1. 详实的产品相关信息；2. 严格的质量管理体系；3. 批次间稳定性高；4. 无外源动物源性；5. 按客户需求，可按需提供相关法规支持文件；6. 生产设备和生产环境符合相关法规要求，符合GMP指导原则；7. 产品进行无菌检测、无支原体，HCP检测；8. 生产设备工艺及测试方法，均经过验证；9. 原材料测试及供应商资质审查；10. 完善的材料审查流程和文档化管理，生产人员资质符合法规要求。