- Source
- Escherichia coli.
- Molecular Weight
- Approximately 20.8 kDa, a single non-glycosylated polypeptide chain containing 183 amino acids.
- AA Sequence
- VPPGEDSKDV AAPHRQPLTS SERIDKQIRY ILDGISALRK ETCNKSNMCE SSKEALAENN LNLPKMAEKD GCFQSGFNEE TCLVKIITGL LEFEVYLEYL QNRFESSEEQ ARAVQMSTKV LIQFLQKKAK NLDAITTPDP TTNASLLTKL QAQNQWLQDM TTHLILRSFK EFLQSSLRAL RQM
- Purity
- > 98 % by SDS-PAGE and HPLC analyses.
- Biological Activity
- Assay #1: Fully biologically active when compared to standard. The ED50 as determined by a cell proliferation assay using IL-6-dependent murine 7TD1 cells is less than 0.1 ng/ml, corresponding to a specific activity of > 1.0 × 107 IU/mg.
Assay #2: Fully biologically active when compared to standard. The ED50 as determined by a cell proliferation assay using IL-6-dependent murine T1165 cells is less than 0.8 ng/ml, corresponding to a specific activity of > 1.25 × 106 IU/mg.
- Physical Appearance
- Sterile Filtered White lyophilized (freeze-dried) powder.
- Formulation
- Lyophilized from a 0.2 µm filtered concentrated solution in 20 mM Tris-HCl, pH 8.0, 150 mM NaCl.
- Endotoxin
- Less than 0.01 EU/µg of rHuIL-6 GMP as determined by LAL method.
- Reconstitution
- We recommend that this vial be briefly centrifuged prior to opening to bring the contents to the bottom. Reconstitute in sterile distilled water or aqueous buffer containing 0.1 % BSA to a concentration of 0.1-1.0 mg/mL. Stock solutions should be apportioned into working aliquots and stored at ≤ -20 °C. Further dilutions should be made in appropriate buffered solutions.
- Stability & Storage
- Use a manual defrost freezer and avoid repeated freeze-thaw cycles.
A minimum of 12 months when stored at ≤ -20 °C as supplied. Refer to lot specific COA for the Use by Date.
1 month, 2 to 8 °C under sterile conditions after reconstitution.
3 months, -20 to -70 °C under sterile conditions after reconstitution.
- Usage
- This GMP product can be for research use or further manufacturing use.
- Quality statement
- The manufacture and testing of this product is in compliance with ICH Q7a guidelines.
- Reference
- 1. Ferguson-Smith AC, Chen YF, Newman MS, et al. 1988. Genomics. 2:203-8.
2. van der Poll T, Keogh CV, Guirao X, et al. 1997. J Infect Dis. 176:439-44.
3. Ming JE, Cernetti C, Steinman RM, et al. 1989. J Mol Cell Immunol. 4:203-11; discussion 211-2.
4. Bastard JP, Jardel C, Delattre J, et al. 1999. Circulation. 99:2221-2.
5. Heinrich PC, Behrmann I, Muller-Newen G, et al. 1998. Biochem J. 334 ( Pt 2):297-314.
- background
- Interleukin-6 (IL-6) is an interleukin that in humans is encoded by the IL-6 gene and acts as both a pro-inflammatory and anti-inflammatory cytokine. It is secreted by T cells and macrophages to stimulate immune response. Furthermore, It plays an essential role in the final differentiation of B-cells into Ig-secreting cells involved in lymphocyte and monocyte differentiation. It also induces myeloma and plasmacytoma growth and induces nerve cells differentiation acts on B-cells, T-cells, hepatocytes, hematopoietic progenitor cells and cells of the CNS. The human IL-6 is a single non-glycosylated polypeptide chain containing 183 amino acids and it signals through a cell-surface type I cytokine receptor complex consisting of the ligand-binding IL-6Rα chain (CD126), and the signal- transducing component gp130 (also called CD130). The human IL-6 shares about 40% a.a. sequence identity with mouse and rat IL-6 and it is equally active on mouse and rat cells.
- 1蛋白为什么要冻干？对蛋白的影响有哪些？
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蛋白质对热敏感，冻干能使蛋白质在存储过程中最大程度的保持活性,延长保存时间,同时也能降低运输成本.冻干对蛋白质的影响包括:可能造成蛋白质部分失活、聚集和其它变性问题。但可以通过添加保护剂（稳定剂，添加剂，辅料）和控制冻干的各种条件来尽可能降低这些负面的影响。
- 2冻干前为什么向蛋白溶液中加保护剂？普欣常用的保护剂是什么？
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冻干对蛋白质的活性会有一定的影响，加入保护剂可以减小这种影响，最大程度上保护蛋白的活性。通常的保护剂或稳定剂有糖类，多元醇，聚合物，表面活性剂，某些蛋白和氨基酸等。本公司常用的保护剂有：海藻糖、甘露醇等。
- 3为什么有的蛋白带标签？
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带标签蛋白一般是为了满足部分客户的实验要求。如需His-tag和GST-tag，可以使用亲和纯化层析柱；与免疫球蛋白的Fc片段融合的蛋白可用于抗体研究等。
- 4蛋白如何定量的？
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通常采用BCA、Bradford和OD280三种方法来定量。
- 5为什么用我的定量方法测出来的结果与普欣标签上的定量不符？
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采用不同的蛋白定量方法，会有不同的结果。有时候定量方法不同造成的结果差异很显著。
- 6我购买了小包装冻干蛋白质，为什么收到货后只有一只空管？
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与市场上的有些蛋白产品不同，本公司绝大部分的产品中不含载体蛋白或其他添加物(如牛血清白蛋白（BSA），人血清白蛋白 (HSA)和海藻糖等），并且以最低含盐量的溶液冻干。因此，微量的蛋白在冻干过程中沉积在管内，形成很薄或几乎看不见的蛋白层，甚至蛋白粉末还会飘悬在管壁上。打开管盖前，我们建议在离心机中快速离心20-30秒，使附着在管盖或管壁的蛋白粉末聚集到管底。
- 7如何重溶（Reconstitute）冻干粉蛋白？
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除非说明书上有更具体的说明，我们建议采用以下方式：
（1）将试剂瓶和重溶缓冲液平衡至室温。
（2）短暂离心试剂瓶以确保在小瓶底部收集所有冻干物。
（3）加入推荐的重溶缓冲液，达到产品说明上推荐的浓度。避免剧烈振荡或移液器吹打，这可能导致蛋白质变性。
（4）使试剂瓶在室温下重溶15-30分钟，可使用360度摇床或手动轻轻上下颠倒。
（5）每管体积不小于10μL分装，并按产品说明书上的指示储存。
（6）如果小瓶内呈现薄片或颗粒，则在室温下将产品混合几小时，然后在4℃过夜。
- 8如何确定蛋白活性实验参考用量？
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凡经过生物活性验证的蛋白产品，在我司产品页面均有活性验证信息，客户可在生物活性(Biological Activity)一栏中查看使用的细胞类型，ED50值等信息。
- 9为何ED50是一个范围？
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生物活性实验是对蛋白质的生物学反应的一种测量。因此，生物活性实验中的任何变化也可能导致不同的结果。这种变化可能包括细胞密度，细胞年龄，传代数，营养状况，培养基和所用的添加剂，以及实验操作者的操作手法。由于生物活性实验的可变性，同一蛋白质在不同情况下可能不会产生相同的ED50。因此普欣的蛋白质说明书上给出ED50的范围。
- 10产品的应用问题
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本公司的产品可以按照科研领域分类，但是对其具体应用并未给出明确指导。鉴于蛋白质根据其功能可以挖掘多重应用领域及应用方法，本公司推荐客户根据文献记载进行试验，或根据科学的研究，自行挖掘其应用方法。
- 11蛋白是否可用于体内实验（In vivo）？推荐浓度是多少？
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普欣蛋白不进行任何体内测试。我们没有这些产品在体内应用中的活性和半衰期数据。
- 12什么是海藻糖（Trehalose），它在配方中起什么作用？
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海藻糖是一种非还原糖，在美拉德反应中不与氨基酸或蛋白质发生反应。它存在于自然界的许多植物和动物中。海藻糖可以稳定蛋白质，防止冷冻造成的伤害，还可以使蛋白质在冻干时更耐水，从而使产品在重溶时产生沉淀的可能性降低。
- 13如果产品包含海藻糖，体内实验（In vivo）是否会对动物产生影响？
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海藻糖不太可能影响体内实验。它已被批准作为一种辅料用于人类注射药物。研发系统使用的海藻糖来自酿酒酵母，经HPAE测定，其纯度至少为98.5%。
- 14海藻糖会影响连接反应（Conjugation）吗？
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海藻糖的存在可能会干扰蛋白质的成功结合。 这将取决于连接的方法，客户最好在购买产品之前做相关研究。
- 15冻干形式的重组蛋白产品到货时是室温运输，说明书显示它应储存在-20ºC。这种运输方式会影响产品活性吗？
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冻干粉产品在环境温度（Ambient）下运输，不会受到影响。冷冻干燥可以提高蛋白产品的稳定性，同时减少包装材料和运输费用。我们对冻干产品的运输条件进行过测试，确保产品质量。
- 16产品如何保存？
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因为产品性质不同，请仔细阅读说明书，并根据说明书描述方法，妥善保存。
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